Информация » Выделение мембранных белков » Выделение мембранных белков

Выделение мембранных белков

Очистка и характеристика мембранных белков ставят перед исследователем целый ряд специфических проблем, с которыми он обычно не сталкивается, работая с растворимыми белками. Мембранные белки, как правило, прочно связаны с липидным бислоем и фактически нерастворимы в воде. Поэтому для их солюбилизации и очистки приходится применять детергенты или другие разрушающие мембрану вещества. Поскольку выделение интегральных белков обычно сопряжено с разрушением мембраны, во многих случаях необходимо убедиться, что в процессе выделения и очистки белка его функциональная активность не оказалась нарушенной или утраченной. Для этого, в частности, можно попытаться провести реконструкцию,

т.е. встроить очищенный белок обратно в мембрану. Функциональную активность некоторых мембранных белков, таких, как ионные каналы или транспортные белки, можно охарактеризовать и измерить только в реконструированных мембранных системах. Для других мембранных белков, выполняющих функции ферментов или рецепторов, полезную информацию часто можно получить, используя солюбилизированные препараты. Методы солюбилизации и реконструкции не только дают ценную информацию о функциях мембранных белков; их можно также использовать для того, чтобы перевести эти белки в состояние, удобное для проведения детального структурного анализа. Несомненно, детергенты будут играть ключевую роль в совершенствовании методов кристаллизации мембранных белков для последующего рентгеноструктурного анализа.

При солюбилизации детергентами возникает вопрос о возможности избирательного извлечения из мембраны именно тех компонентов, которые интересуют исследователя. Поэтому любой новый детергент желательно проверять на возможность избирательной экстракции определенных мембранных компонентов. Ни один из имеющихся детергентов не является универсальным.

Это обусловлено тремя обстоятельствами:

1) сильными различиями в действии детергентов даже на одни и те же мембранные белки;

2) отсутствием единой стратегии солюбилизации и реконструкции;

3) сложным характером взаимодействий между молекулами белков, липидов и детергентов, имеющих столь разную химическую природу.

Существуют определенные требования к детергентам, применяемым для солюбилизации и реконструкции. Детергент должен солюбилизировать, но не денатурировать белок и должен быть легко доступен в чистом виде; желательно, чтобы детергент был недорогим.


Похожие материалы:

Семейство ДОЛГОНОГОВЫЕ(Pedetidae)
Единственный вид, выделенный в это семейство. Внешне зверек очень напоминает миниатюрного кенгуру или гигантского тушканчика (ростом с зайца). Местное название долгонога означает «заяц-прыгун». Волосяной покров на спине долгонога серовато ...

Типы конституции
По классификации Кулешова – Иванова основные типы конституции лошадей характеризуются следующими показателями. Крепкая конституция. Этот тип конституции желателен для всех пород лошадей. Он характеризуется хорошим общим развитием животно ...

Становление эволюционной теории
Эволюционное учение - это совокупность представлений о механизмах и закономерностях исторических изменений (эволюции) в живой природе. Предметом изучения эволюционного учения являются факторы, конкретные пути и механизмы эволюции отдельн ...